Técnicas de Análisis de DNA

Inconvenientes: información aportada( las sondas multi-locus tienen una mayor capacidad discriminativa al aparecer múltiples bandas. No obstante, la mono-locus son más específicas ya que el fragmento de ADN con el que hibridan es de mayor tamaño), cantidad y calidad del ADN( cuando se usan sondas multi-locus se requiere aproximadamente un microgramo de ADN sin degradar mientras que el otro mucho menos y no necesariamente el ADN debe estar perfecto), Especifidad entre especies( las sondas multi-locus permiten su uso sobre el ADN humano y de cientos de animales superiores, mientras que las mono-locus son exclusivas de ADN humano.

Análisis por la Reacción de la cadena de la Polimerasa (PCR)

:

Este análisis permite amplificar más de un millon de veces un ADN obtenido a partir de una región seleccionada del genoma, siempre y cuando se conozca una parte de su secuencia de nucleótidos. Para esta se utilizan dos oligonucleótidos sintéticos de unos 15-20 nucleótidos que son complementarios a las zonas flaqueantes de la región que se quiere amplificar. Estos oligonucleótidos actúan como cebadores para la síntesis in vitro de ADN la cual está habitualmente catalizada por una enzima llamada taq polimerasa. La reacción se lleva a cabo en una serie de tres fases o pasos: 1. Desnaturalización (es necesario que el ADN molde se encuentre en forma de cadena sencilla, rompiendo los puentes de hidrógeno y separando ambas cadenas) 2. Hibridación(fase de emparejamiento y se unen los primers a las secuencias flaqueantes del fragmento que se va a amplificar. ) 3. Extensión (en este paso la Taq polimerasa incorpora nucleótidos en el extremo 3' del primer utilizando como molde la cadena de ADN previamente desnaturalizada. La temperatura a la que se lleva a cabo este paso suele ser de 72°C.

Hibridismo con sondas:

Digestión del ADN con enzimas de restricción tras conseguir ADN de alta molecularidad, separación de los fragmentos obtenidos por medio de una electroforesis en gel de agarosa, desnaturalización de los fragmentos separados y cortados, trasferencia de las cadenas simples a una membrana de nitrocelulosa o nylon y fijación de las mismas por medio de calor, prehibridación con sondas de ADN inespecífico para bloquear los lugares de unión inespecíficos que pudiera haber en la membrana, marcaje de la sonda con nucleótidos radioactivos, hibridación de la sonda marcada y desnaturalizada y lavado de la membrana, y por último el revelado y la interpretación de los resultados.

Pregunta Problema 3

1.¿Son las muestras de sangre mejores que las bucales?
R/: Las mejores muestras son las de sangre, porque tienen más tiempo de “duración” por si hay algún error, volverlas a consultar, mientras que las bucales tienen un “problema”, son muy sensibles a la humedad y pueden descomponerse o perder toda la muestra.

2.¿Que tan precisos son los resultados en las pruebas de ADN?¿Que quiere decir 100% exclusión de paternidad?

R1/: Estos resultados son muy precisos, ya que si el resultado da negativo esto quiere decir que el padre tiene un 0% de q sea el verdadero padre, mientras que si el resultado es positivo, el porcentaje tendrá que ser mayor de 99 y el padre será el verdadero.

R2/: quiere decir que el padre tiene toda la probabilidad de ser el verdadero padre, pero también se debe tener en cuenta que los alelos del hijo coincidan con los del padre.

3.¿Es necesario que la madre también se analice?

R/: Analizar solo al padre con eso es suficiente, pero si se quieren tener mejores resultados, la madre también puede ser analizada.

4.¿Se puede hacer pruebas de paternidad prenatales?

R/: Hay que hacer un procedimiento especial, pero podría ser peligroso para el feto y para el embarazo.

5.¿Se puede hacer una prueba de paternidad sin el consentimiento de la madre?

R/: Se puede hacer siempre y cuando el padre sea el verdadero y dependiendo de la legislación de cada país. También es mejor tener una prueba de la madre.

6.¿Porque algunos resultados de índice combinado de paternidad dan 99.98% y otros 99.9999995% ?, por ejemplo

R/: Cuando los hay alelos comunes, los índices son un poco más bajos pero igual dan exactitudes, mientras que si no hay alelos comunes, el índice se va a elevar.